Analyse des cryoglobulines et maîtrise de la température de centrifugation : l’expérience de l’APHP
3 janvier 2023 2023-01-03 15:06Analyse des cryoglobulines et maîtrise de la température de centrifugation : l’expérience de l’APHP
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Analyse des cryoglobulines et maîtrise de la température de centrifugation : l’expérience de l’APHP
La qualité de l’analyse des cryoglobulines est dépendante de la maîtrise du processus de centrifugation de l’échantillon. Jusqu’en 2021, il n’existait aucune possibilité de contrôle fiable des différents paramètres influant sur la centrifugation et la seule garantie dépendait d’une bonne maîtrise technique de la part du laboratoire. L’intérêt clinique associé au résultat de la recherche d’une cryoglobuline, à son dosage et à sa caractérisation ne sont plus à démontrer. Aussi, trouver les moyens d’améliorer la maitrise de la température, cruciale pour la qualité de cette analyse, était devenu indispensable pour de nombreux laboratoires hospitaliers qui l’appelaient de leurs vœux.
Après un rappel autour de l’importance de l’examen et de la maitrise de la température dans la phase pré analytique, nous verrons comment l’APHP a pris en main ce contrôle pour les centrifugeuses dédiées aux cryoglobulines sur ses sites de St Louis et Lariboisière.
Qu’est ce que les cryoglobulines et pourquoi la température de centrifugation est-elle critique ?
Les cryoglobulines sont des complexes multimoléculaires qui comprennent au moins une classe d’immunoglobulines, associées parfois à d’autres protéines. Elles précipitent à basse température et sont à nouveau dissoutes lorsque le sérum est réchauffé à 37°C [1]. Les cryoglobulines peuvent permettre le diagnostic des hémopathies lymphoplasmocytaires, des maladies immunoprolifératives et maladies inflammatoires chroniques auto-immunes, infectieuses ou virales [2]
Le respect d’une température de 37°C est donc critique dans le cadre des cryoglobulines, en effet leur dosage et leur analyse présentent une fréquence de prescription élevée, et jusqu’en 2021, il n’existait, pour cet examen, pas de possibilité de contrôle de la température sur l’ensemble des étapes du processus. La qualité de l’analyse reposait dont sur la bonne maîtrise technique du laboratoire.
Prélèvement et transport de l’échantillon, le maintien en température à 37°C est crucial
Une cryoglobuline peut précipiter à une température différente d’un patient à l’autre, et jusqu’à 36°C. C’est dire l’extrême attention qui doit être portée à la température dès la phase pré- analytique de cet examen.
Points essentiels de vigilance au moment du prélèvement :
Le prélèvement doit s’effectuer sur un patient à jeun depuis 12 heures. La salle de prélèvement ne doit pas obligatoirement être chauffée à 37°C. Les tubes sans gel et sans additif doivent être préférés et seront chauffés à 37°C. Généralement on recommande l’usage de 3 tubes secs sous vide de 5mL ( ou 2/3 tubes de 7mL). Le volume de serum s’élèvera ainsi à 5 mL.
Le transport de l’échantillon : Maitrisez la température !
Le transport de l’échantillon sanguin doit préserver une température de 37°C. Le choix du dispositif est donc crucial.
Plusieurs solutions sont utilisées par les laboratoires de biochimie :
- Valisette thermostatée 15 L type Coleman chauffée à 37-39°C
- Poches isolantes avec coussins thermiques
- Thermos de sable de Fontainebleau placées dans une étuve à 37°C
Un expert que l’on connait bien ici recommande :
- Une solution stable en température pour les transports d’échantillon en navette automobile : l’incubateur microbiologique
- Une solution plus économique de sacoche de transport avec accumulateur à 37°C
On prévoira 2 sacoches pour un CH de 1000 lits/ 500 cas d’analyse annuels, et l’on veillera à les équiper d’un système de traçabilité / localisation.
Coagulation et centrifugation : Contrôlez la température !
Lorsqu’ils arrivent au laboratoire, les tubes rejoignent un étuve à 37°C . Dans cette étuve la coagulation se produit sur une durée de 2 heures minimum, 5 heures recommandées, et ne dépassant jamais 24 heures pour éviter toute hémolyse.
Les recommandations de centrifugation sont les suivantes 3500 rpm ( révolutions par minute) pendant un quart d’heure, à 37°C dans une centrifugeuse thermostatée. Les nacelles et godets peuvent être préchauffés à 37°C.
C’est le respect absolu de ce maintien en température à 37°C du prélèvement à l’issue de la phase dynamique de centrifugation, qui est garant de la fiabilité des résultats des examens de cryoglobulines.
S’appuyer sur une méthode de contrôle accréditée COFRAC de la température dans une centrifugeuse en mouvement : l’expérience APHP
Lorsque Mmes Güler Aydin et Magali Thoraval, en charge de la métrologie au Groupe Hospitalo-Universitaire AP-HP. Centre-Université de Paris(Cochin, Necker, Hôpital Pompidou, etc.) ont été auditées par le COFRAC lors de l’audit de leurs processus, ce dernier les a interrogées à propos de la maitrise du contrôle de la température dans la phase dynamique des centrifugeuses. Pensant qu’il n’existait pas de partenaire en mesure de pouvoir réaliser ce type de contrôle métrologique, elles imaginaient s’exonérer d’un éventuel écart constaté par l’auditeur.
Or depuis septembre 2021, une acteur de la métrologie dans le laboratoire a déployé une méthode de vérification dédiée, faisant l’objet d’une accréditation COFRAC n° 1-2479 – portée disponible sur www.cofrac.fr
Il est donc désormais nécessaire, pour le laboratoire de pouvoir répondre, lors d’un audit COFRAC en termes de performance de la centrifugeuse, de reproductibilité des résultats, d’homogénéité du résultat tout au long de la phase pré analytique, et de l’impact de la rotation des nacelles et godets contenant les tubes, en phase dynamique du processus de centrifugation, sur le maintien d’une température de 37°C de l’échantillon.
L’APHP – et notamment Mme Magali Thoraval, et Mr Bruno Locchi (métrologue), font donc désormais régulièrement appel à Mr Christophe Balichard ( Responsable Innovation Métrologique chez LABELIANS) et à l’équipe du laboratoire LABELIANS smart service afin d’effectuer les pré audit, intervenir sur les sites – Hôpital St Louis pour plusieurs centrifugeuses, et Hôpital Lariboisière – pour les aider à lever ces écarts.
